Ao abordarmos a quantificação de bioinsumos e microrganismos para controle de qualidade de bioinsumos, uma pergunta recorrente é se os valores são obtidos por qPCR são equivalentes à UFC (Unidade Formadora de Colônia). A resposta, em tese, é que sim, já que ambas as técnicas contam células íntegras de um microrganismo específico. No entanto, os resultados podem variar, e é crucial compreender as nuances desse processo.
qPCR x UFC
O qPCR (Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real) opera por meio da fluorescência, identificando o número de cópias de uma sequência de DNA. Ao selecionarmos uma região específica do genoma do microrganismo alvo e projetarmos oligonucleotídeos, o aparelho busca essa região genômica predefinida. O resultado é o tempo necessário para detectar a região, indicando a quantidade de cópias de DNA.
Por outro lado, a quantificação de bioinsumos por microbiologia clássica envolve o cultivo do microrganismo em uma placa de petri, onde uma alíquota do produto é combinada com um meio de cultivo propício ao crescimento celular. A técnica assume que cada célula formará uma colônia, contada visualmente após o período de crescimento. Cada colônia é considerada uma UFC, originada de uma única célula.
Embora os resultados de qPCR e UFC se equiparem em teoria, há diferenças práticas notáveis. Enquanto o qPCR avalia o DNA com tecnologia, o UFC resulta de um cultivo de células. Essas diferenças podem ser atribuídas às variáveis envolvidas na contagem de placa, como o processo manual, a subjetividade do observador e a influência de fatores como qualidade do meio de cultura e técnicas de contagem.
Aqui na GoGenetic, realizamos a validação do método molecular para cada microrganismo, padronizando a técnica para diversos produtos. Antes de implantar a biomol para uma indústria, conduzimos ensaios pareados para equalizar as curvas do qPCR em relação à contagem de UFC. Este processo de equalização é essencial para garantir a precisão e a confiabilidade dos resultados, proporcionando uma transição suave entre as técnicas.
